（一）核酸提取试剂和检测试剂需具备三证，并通实验室性能验证。

（二）移液器枪头应为带滤芯枪头。

七、标本采集

（一）采集对象。需要进行新冠核酸检测的个体。

（二）采集准备。咽/鼻拭子、采样管、采样杯、三级生物安全个人防护装备

（三）采集标本类型。新冠核酸检测的样本类型一般包括上呼吸道的咽拭子、鼻拭子、鼻咽拭子，下呼吸道的深咳痰液、呼吸道抽取物、支气管灌洗液、肺泡灌洗液和肺组织活检标本。为提高呼吸道样本的新冠核酸阳性检出率，兼顾采样的便捷性，首选深咳痰，其次鼻咽拭子，最后才是咽拭子,也可同时采集同一人的鼻拭子和咽拭子并放入同一病毒采样液中。

（四）标本采集方法。

1.咽拭子：被采样人坐下，头后倾，张大嘴，并发“啊”音。咽拭子越过舌根到咽后壁及扁桃体隐窝、侧壁等处。先用拭子适度用力来回擦拭双侧咽扁桃体至少3次，然后再咽后壁至少3次。取出拭子，避免触及舌头、悬垂体、口腔粘膜和唾液。将拭子头浸入含3ml采样液的管中。靠近顶端处折断无菌拭子杆，尾部弃去，旋紧管盖。

2.鼻咽拭子：被采样人头部后仰（约70。），保持不动。用鼻拭子估测耳根到鼻孔距离。自鼻孔垂直面部方向插入，深入距离最少应达耳垂部位到鼻尖长度的一半。遇到阻力后即到达后鼻咽，应停留数秒吸取分泌物（一般要求15～30s），应旋转拭子3～5次。宜轻轻旋转取出拭子，拭子头浸入装有3ml采样液中。顶端处折断无菌拭子杆，尾部弃去，旋紧管盖。

3.深咳痰液：用清水（勿用含消毒剂的漱口液）漱口2～3次，有假牙者取出假牙后漱口，要求病人深咳后，将咳出的痰液收集于采样杯（含3ml采样液（细胞保存液）的50ml螺口痰杯）中。

4.支气管灌洗液：将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气管（约30cm深处），注入5ml生理盐水，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用采样液冲洗收集器1次（亦可用小儿导尿管接在50ml注射器上来替代收集）。

5.肺泡灌洗液：局部麻醉后将纤维支气管镜通过口或鼻经过咽部插入右肺中叶或左肺舌段的支管，将其顶端契入支气管分支开口，经气管活检孔缓缓加入灭菌生理盐水，每次30～50ml，总量100～250ml，不应超过300ml。

送检标本管/杯外必须贴含样本编号、种类、姓名及采样日期等信息的识别条码。在采样记录单上同时记录并张贴识别条码。

（五）标本运输。将密闭后的标本管/杯装入密封袋，每袋限一份标本，依次装入标本盒、新冠专用标本转运箱，并保持标本直立，70%酒精消毒后封闭，并由专人转运到实验室。转运期间不能自行打开转运箱，并保持转运箱平稳，避免剧烈震荡、颠簸。

内部转运时，应采集之后30min内运抵实验室，不宜超过2h；涉及外部标本运输的，应根据标本类型，按照A类或B类感染性物质进行三层包装。宜冷藏条件下定时定点转运交接，转运时间不超过8h。

标本采集后应置于4℃环境保存，保存时间不超过24h。

（六）标本保存。用于病毒核酸检测的标本应尽快进行检测，能在24小时内检测的标本可置于4℃保存；24小时内无法检测的标本则应置于-70℃或以下保存（如无-70℃保存条件，则于-20℃冰箱暂存）。应设立专库或专柜单独保存标本。标本运送期间应避免反复冻融。

（七）标本接收

1.确认样本在装箱前有消毒环节，并在开箱瞬间用75%乙醇喷雾消毒。

2.核实样本信息。

八、实验室检验

（一）新冠核酸提取。在标本制备室，须2名实验室操作人员着生物安全三级个人防护装备进行病毒RNA提取，确保生物安全。进行核酸提取时，标本的开盖、取样或核酸的人工提取等操作都在生物安全柜内两人配合进行，检验操作过程中尽可能缩短打开样本管盖的持续时间，轻柔操作，尽可能避免产生气溶胶。

（二）新冠核酸检测。推荐选用针对新冠的ORF1ab、N基因区域的引物和探针。

靶标一（ORF1ab）:

正向引物（F）：CCCTGTGGGTTTTACACTTAA

反向引物（R）：ACGATTGTGCATCAGCTGA

荧光探针（P）：

5'-FAM-CCGTCTGCGGTATGTGGAAAGGTTATGG-BHQ1-3'

靶标二（N）:

正向引物（F）：GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT

反向引物（R）：CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG

荧光探针（P）：

5'-FAM-TTGCTGCTGCTTGACAGATT-TAMRA-3'

核酸提取和实时荧光RT-PCR反应体系及反应条件参考相关厂家试剂盒说明。

结果判断：

阴性:无Ct值或Ct≥40。

阳性：Ct值<37，可报告为阳性。

灰度区：Ct值在37-40之间，建议重复实验，若重做结果Ct值<40，扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性,否则为阴性。

注：如果用的是商品化试剂盒，则以厂家提供的说明书为准。

（三）阳性结果的认定。由卫生健康行政部门批准的确认实验室进行阳性样本确认检测；非确认实验室的结果阳性，须立即联系当地的疾控中心进行核酸结果的确认检测。实验室确认阳性病例需满足以下两个条件中的一个：